Multiplex IHC Optimization: Antibody Titration & Fluorophore Pairing | CST Tech Tips

При разработке панели антител для мультиплексной иммуногистохимии важно оптимизировать разведение каждого антитела и подобрать к какому флуорофору оно относится. Это поможет добиться сбалансированного набора сигналов при окрашивании. 💡 Получите полезные советы и рекомендации по методикам, публикациям и построению научной карьеры: https://www.cellmentor.com/ 🎦 Видеообзор протокола мультиплексной иммуногистохимии: https://www.youtube.com/watch?v=yNEEvxTX-lc ℹ️ Ссылка на протокол CST® для флуоресцентной мультиплексной иммуногистохимии: https://cst-science.com/e7obrg 👩🏾🔬 Свяжитесь с ученым CST: https://cellsignal.com/support 📳 Подпишитесь на канал, чтобы получать больше технических советов: http://youtube.com/user/cellsignaldotcom?sub_confirmation=1 Транскрипт: Как определить оптимальную концентрацию антител и как получить сбалансированный набор сигналов при флуоресцентной мультиплексной иммуногистохимии? Меня зовут Джен, я старший научный сотрудник Cell Signaling Technology, и это CST Tech Tips. Перед первым экспериментом по мультиплексной иммуногистохимии (ИГХ) с использованием флуоресцентных антител вам необходимо спланировать протокол и оптимизировать такие параметры, как разведение антител и сочетание флуорофоров для каждой мишени. Если вы только начинаете работать с протоколом мультиплексной ИГХ, вы можете посмотреть наше первое видео с обзором оптимизации протокола. https://www.youtube.com/watch?v=yNEEvxTX-lc В противном случае, продолжайте смотреть здесь, чтобы узнать больше о титровании антител и оптимизации порядка. И поставьте лайк этому видео и подпишитесь на канал, чтобы получать больше технических советов по ИГХ и другим методам. При переходе от протокола с одним красителем к мультиплексному протоколу с тирамидным усилением, при котором используется валидированное для ИГХ антитело, важным фактором является относительная интенсивность окрашивания каждого антитела и флуорофора в вашей панели. Оптимальное разведение для каждого антитела может различаться между хромогенными и флуоресцентными протоколами обнаружения благодаря более высокому усилению сигнала, обеспечиваемому конъюгатами тирамида и флуорофора. Мы рекомендуем проводить титрование для каждого первичного антитела в вашей панели, используя конъюгат тирамидного флуорофора средней интенсивности в одноплексном режиме. После определения оптимального разведения для каждого антитела, ваша следующая задача — получить сбалансированный набор сигналов. Некоторые мишени в вашей панели могут быть более распространены, чем другие, и яркость флуорофоров в вашей панели также может варьироваться. В идеале, вы должны сочетать антитела с наиболее сильным мечением или наиболее обильной экспрессией целевого белка с наиболее слабыми доступными конъюгатами тирамидного флуорофора. И наоборот, вы можете сочетать антитела с наиболее слабым окрашиванием с наиболее яркими конъюгатами. Мы рекомендуем создать матрицу, состоящую из каждого первичного антитела, применяемого в его оптимизированном разведении, в паре с каждым доступным флуорофором. Выберите пары антител-флуорофоров для каждой мишени, которые демонстрируют высокую интенсивность сигнала и высокое соотношение сигнал/шум. Затем, после того как вы соберете свою панель и начнете мультиплексирование, рекомендуется сравнить результаты флуоресцентной иммуногистохимии (ИГХ) для каждого антитела в рамках одного мультиплекса с результатами мультиплексной панели, чтобы подтвердить, что каждое антитело работает должным образом в рамках мультиплексного протокола. Спасибо за просмотр! Не забудьте подписаться на канал, чтобы получать больше технических советов, и если они окажутся полезными, поставьте лайк этому видео и поделитесь им с коллегами. Если у вас есть какие-либо вопросы о протоколе или антителе, вы всегда можете связаться с ученым CST по адресу https://cellsignal.com/support. Удачи в ваших экспериментах! О компании CST®: Cell Signaling Technology (CST) — это частная семейная компания, основанная учеными и занимающаяся предоставлением высококачественных исследовательских инструментов для биомедицинского исследовательского сообщества. Наши сотрудники работают по всему миру из нашей штаб-квартиры в Массачусетсе, США, а также наших офисов в Нидерландах, Китае и Японии. https://cellsignal.com/about Все товарные знаки являются собственностью их соответствующих владельцев. Актуальную информацию о товарных знаках можно найти на сайте www.cellsignal.com/trademarks #антитела #CSTTechTips #MultiplexIHC